Existuje mnoho způsobů, jak měřit růst bakterií, a jeden způsob je komplikovanější než druhý. I když někdy je nutné ignorovat konzistenci měření, nejjednodušší způsob stačí k přesnému měření růstu bakterií, takže se často používá. Nejčastěji používanými metodami jsou monitorování a počítání bakterií, měření suché nebo mokré hmoty a měření zákalu/zákalu. Laboratoř vaší školy by měla mít nástroje a vybavení potřebné k provedení alespoň jednoho z těchto experimentů.
Krok
Metoda 1 ze 3: Sledování živých bakterií
Krok 1. Připravte si ingredience
Existuje mnoho speciálních nástrojů, které je třeba připravit a nemusí být k dispozici v biologické laboratoři. Před spuštěním experimentu připravte veškeré vybavení a nádoby, aby během procesu nedocházelo k žádným potížím. Okamžitě budete muset znát každou použitou přísadu a základní pojmy tohoto experimentu.
- Připravte sčítací komoru. Má vestavěnou komoru, mikroskopické sklo a mikroskop, takže je snadné jej nastavit a používat. Můžete si ji koupit v laboratoři nebo ve školním obchodě. Tento nástroj by měl mít pokyny, které vás provedou celým procesem.
- Připravte si nalévací šálek nebo pomazánku. Oba tyto kontejnery vám umožňují sledovat bakterie uvnitř.
- Kultura je termín používaný k popisu růstu organismů v experimentu.
- Vývar je tekuté médium, ve kterém kultura roste.
Krok 2. Použijte metodu nalévací desky nebo pomazánky
Bakterie můžete také umístit přímo na misku pro prohlížení pomocí mikroskopu. Nalijte kulturu na podšálek a umístěte ji pod mikroskop. Monitorujte počet přítomných bakteriálních buněk.
Krok 3. Ujistěte se, že je koncentrační dávka správná
Pokud je jich příliš mnoho, bakterie se na sebe hromadí a můžete se přepočítat. Kulturu zřeďte smícháním více vývaru. Pokud je jich příliš málo, výsledky výpočtu nebudou přesné. Vývar sceďte pomocí filtračního systému.
Krok 4. Počítejte bakterie
Posledním krokem je spočítat bakterie jednu po druhé. Podívejte se zvětšovací čočkou v počítací komoře a zapište si počet bakterií, které vidíte. Porovnejte výsledky s výsledky jiných testů.
Metoda 2 ze 3: Měření suché a mokré hmotnosti
Krok 1. Ujistěte se, že máte správné vybavení
Tato metoda využívá drahé vybavení a spoustu času. Pokud vaše laboratoř nemá potřebné vybavení, je vhodné použít jinou metodu. Pokud je však vaše laboratoř dostatečně dobře vybavena, doporučujeme tuto metodu, protože poskytuje konzistentnější výsledky. Při této metodě budete potřebovat:
- Hydraulická gravitační konvekční trouba
- Vážící nádoba z hliníku
- Sada lahví (laboratorní lahve)
- Odstředivý stroj (odstředivka) nebo laboratorní filtrační systém
Krok 2. Ujistěte se, že kultura je v baňce
Přidejte kulturu do dýně. V této fázi by kultura měla být vývarem, i když později bude znovu oddělena.
Krok 3. Vysušte hliníkovou vážicí nádobu v laboratorní troubě
Místo toho můžete použít filtrační membránu z acetátu celulózy o průměru 47 mm a velikosti pórů 0,45 µm. Ať už používáte jakýkoli vážící kontejner, odvažte jej, protože jej budete muset odečíst později při vážení bakteriálních buněk.
Krok 4. Kulturu míchejte v baňce, dokud není rovnoměrně promíchána
Cela se přirozeně potopí v důsledku gravitace a bude třeba ji promíchat, aby se rovnoměrně rozložila v baňce. Tímto způsobem můžete mít více vzorků.
Krok 5. Pomocí centrifugy oddělte bakteriální buňky od bujónu
Tento nástroj otáčí baňkou a rychle se ekvilibruje tak, že vypustí vývar a nechá kulturu v baňce.
Krok 6. Oškrábejte pastu na dýni a vložte ji do nádoby na vážení
Vylijte vývar, protože ho již nepotřebujete. Dýně se však zatím nezbavujte, protože bude stále používána.
Krok 7. Vypláchněte odstředivý stroj a nalijte do nádoby oplachovou vodu
Kápnutím oplachové vody do baňky na bakteriální buňky získáte mokrou hmotnost.
Krok 8. Najděte suchou hmotnost
K měření suché hmotnosti vložte nádobu do trouby a sušte při 100 ° C po dobu 6–24 hodin podle pokynů z trouby a/nebo použité nádoby na vážení. Ujistěte se, že teplota není příliš vysoká, aby se bakterie nespálily. Po dokončení odvažte bakterie a nezapomeňte výsledek snížit o hmotnost nádoby na vážení.
Metoda 3 ze 3: Měření zákalu
Krok 1. Připravte si potřebné vybavení
Budete potřebovat světelný zdroj a spektrofotometr. Obojí lze získat v obchodech s laboratorními potřebami. Spektrofotometr by měl mít pokyny, které vás povedou při používání přístroje podle modelu, který máte. Cena spektrofotometru je poměrně dostupná a snadno se používá, takže se může stát jednou z nejčastěji používaných metod pro měření růstu bakterií.
Krok 2. Zapalte vzorek
Podle Laymanova výrazu je zákal úroveň zákalu vzorku. Musíte získat číslo měření zákalu, které se měří v NTU (Nefelometrická jednotka zákalu). Tento nástroj je nutné před přesným měřením vzorku zkalibrovat.
Krok 3. Zaznamenejte výsledky
Zákal je ovlivněn počtem bakterií ve vzorku. Spektrofotometr vám také řekne procento přenosu (%T). Toto číslo se zvýší, pokud se zákal sníží. Porovnejte výsledky s výsledky jiných testů pro měření růstu bakterií.
Varování
- Vzhledem k tomu, že máte co do činění s kolonií bakterií, proveďte preventivní opatření nošením ochranného vybavení, jako jsou ochranné brýle a rukavice. Je také dobré nosit masku, zvláště pokud neznáte typ zkoumaných bakterií.
- Před manipulací s jakýmkoli druhem bakterií, dokonce i neškodným, proveďte předběžná opatření. Před zahájením se ujistěte, že jsou všechny otevřené rány na vašem těle zcela zakryty.
